Testul ELISA detectează numeroase boli, motiv pentru care a găsit o aplicare largă în medicină și multe altele. Cu toate acestea, testul ELISA este cel mai bine cunoscut pentru diagnosticul bolii Lyme. Ce este testul ELISA? Cum se interpretează rezultatele? Care este prețul testului?
Cuprins:
- Test ELISA - ce detectează? Aplicarea testului ELISA
- Test ELISA - care este testul?
- Testul ELISA și boala Lyme - când să efectuați?
- Test ELISA - preț. Cât costă un test ELISA?
- Test ELISA - rezultate. Pot fi fals pozitivi?
- Test ELISA - rezultate. Pot fi fals negative?
Testul ELISA, adică testul imunosorbent legat de enzime, este o metodă de laborator frecvent utilizată care servește, printre altele, pentru detectarea cantitativă a anticorpilor din sânge.
Din acest motiv, testul ELISA și-a găsit aplicarea în diagnosticarea bolilor bacteriene, cum ar fi borrelioza Lyme.
Avantajul metodei ELISA este simplitatea și posibilitatea implementării rapide, precum și sensibilitatea ridicată. Metoda ELISA este realizată folosind plăci de plastic speciale cu godeuri umplute cu, de exemplu, proteine Borrelia (antigene) și anticorpi monoclonali specifici, care sunt proiectate pentru a detecta anticorpii din proba pacientului.
Test ELISA - ce detectează? Aplicarea testului ELISA
Sensibilitatea ridicată și simplitatea metodei ELISA au făcut-o aplicabilă în diagnosticul multor boli, dar este cunoscută mai ales ca metodă de diagnostic a bolii Lyme.
În cazul diagnosticului de borrelioză Lyme, așa-numita ELISA indirectă, care permite detectarea IgM sau IgG specifice în materialul testat. În același mod, anticorpii pot fi detectați pentru diagnostic:
- infecții virale: herpesvirusuri (herpes, herpes zoster, Epstein-Barr, citomegalovirus), HIV, virusuri ale hepatitei (VHB și VHC)
- infecții cu protozoare: toxoplasmoză, giardioză
- boli autoimune: boala celiacă (anticorpi anti-tTG sau anti-DPG), boala Hashimoto (anticorpi anti-TG și anti-TPO), boli inflamatorii intestinale (anticorpi anti-ASCA și anti-ANCA)
- boli parazitare și alergii în care sunt detectați anticorpi IgE specifici. Nivelul lor crescut poate indica prezența alergiilor la, de exemplu, polen și alimente sau invazii parazitare (tenie armată, viermi rotunzi umani)
Există, de asemenea, modificări ale metodei ELISA (așa-numitul sandwich ELISA), care permit detectarea unui eșantion de proteine, altele decât anticorpii. Apoi, scopul testului este de a detecta în materialul biologic:
- fragmente de viruși sau bacterii, cel mai adesea sunt antigene caracteristice pentru un anumit agent patogen
- hormoni serici, de exemplu estrogen, prolactină, TSH, fT4, cortizol
- enzime, de exemplu calprotectina, elastaza pancreatică, fosfataza alcalină
- markeri tumorali, de exemplu CA-125
- prezența medicamentelor în ser
Această metodă este aplicabilă și în industria alimentară, unde poate detecta urme de alergeni (de exemplu, lapte, arahide), OMG-uri sau toxine din alimente.
Test ELISA - despre ce este vorba?
Diagnosticul, de exemplu, al borreliozei Lyme folosind metoda ELISA constă în detectarea proteinelor imune din materialul biologic - anticorpi care apar în timpul răspunsului împotriva antigenilor Borrelia.
Anticorpii sunt testați în două clase, IgM și IgG. IgM-urile sunt primii anticorpi care apar în organism atunci când intră în contact cu bacteriile și scad în timp.
Locul lor este luat de anticorpi IgG mai persistenți, care pot rămâne în organism câteva zeci de ani.
În acest fel, prezența bacteriilor în organism este testată indirect prin detectarea anticorpilor îndreptați în mod special împotriva spirochetelor Borrelia.
Anticorpii din diferite stadii ale infecției pot fi direcționați împotriva unei varietăți de proteine Borrelia. De exemplu, într-un stadiu incipient este proteina p41.
În etapele ulterioare, încep să apară tot mai multe proteine, cum ar fi p21, p30, p39, p43. Acesta este motivul pentru care diagnosticul bolii Lyme este extrem de dificil.
Selecția proteinelor bacteriene este extrem de importantă pentru ca testul să aibă o valoare diagnostic mare. Prin urmare, în mod obișnuit în diagnosticul bolii Lyme, ar trebui utilizate teste ELISA de generație II sau III, în care seturile de proteine sunt selectate pentru a obține rezultatul cel mai fiabil.
Test ELISA și boala Lyme. Când să faci?
Borrelioza Lyme este o boală bacteriană cauzată de bacteriile Borrelia burgdorferi și numeroasele sale varietăți.
Diagnosticul bolii nu este ușor datorită complexității răspunsului imun împotriva lui Borrelia și a imperfecțiunilor metodelor de laborator.
Cea mai frecvent utilizată metodă de laborator este metoda ELISA extrem de sensibilă, care detectează anticorpi specifici crescuți împotriva proteinelor bacteriene.
În diagnosticul borreliozei Lyme, se utilizează o metodă ELISA indirectă în care se disting următoarele etape:
- incubarea godeurilor pe placă cu material colectat de la pacient, de exemplu ser. Dacă există anticorpi împotriva Borrelia în materialul testat, aceștia se atașează la proteinele de la baza reacției
- apoi excesul de ser este clătit cu un fluid de spălare special (tampon) și așa-numitul conjugat, adică un anticorp legat de o enzimă care se leagă de anticorpii legați anterior în godeurile de reacție
- apoi se adaugă substratul pentru conjugat și are loc o reacție de culoare (rezultat pozitiv) sau nicio reacție de culoare (rezultat negativ)
- ultimul pas este citirea de către cititor (spectrofotometru) a concentrației de anticorpi împotriva Borreliei în serul pacientului
Testul ELISA pentru boala Lyme se efectuează din sânge și, în cazul simptomelor neurologice (neuroborrelioză), și din lichidul cefalorahidian.
Lichidul sinovial nu trebuie testat deoarece există o probabilitate mare de rezultate fals pozitive.
Baza diagnosticării bolii sunt simptomele clinice care o indică, confirmate de rezultatele testelor de laborator.
Adăugarea unui rezultat al testului de laborator fără simptome nu autorizează diagnosticul bolii Lyme, deoarece s-a demonstrat că anticorpii împotriva Borrelia sunt detectați și la persoanele sănătoase.
Diagnosticul serologic al borreliozei Lyme începe cu un test ELISA de screening semicantitativ. Dacă rezultatul este negativ, înseamnă că nu au fost detectate spirochete Borrelia sau rezultatul este un fals negativ.
Dacă rezultatul este pozitiv sau slab pozitiv (echivoc), ar trebui efectuate teste confirmative Western blot, care se caracterizează prin specificitate ridicată.
Aceasta este pentru a confirma că rezultatele ELISA sunt „adevărate”. În timpul diagnosticării, nu puteți sări peste nici unul dintre pașii de mai sus și, de exemplu, efectuați imediat un diagnostic folosind metoda Western blot sau faceți un diagnostic bazat doar pe un rezultat ELISA pozitiv.
În Polonia, diagnosticul de borrelioză Lyme se încheie foarte des în prima etapă de screening, ceea ce determină o interpretare greșită a rezultatelor pozitive sau slab pozitive.
Articol recomandat:
Test de transformare a limfocitelor (LTT) Bine de știutTest ELISA - preț. Cât costă un test ELISA?
Testul costă aproximativ 60 PLN și se face imediat. Cu toate acestea, puteți aștepta aproximativ trei luni pentru rezultatele sesizării.
Test ELISA - rezultate. Pot fi fals pozitivi?
Rezultatele fals pozitive rezultă din reactivitatea încrucișată a anticorpilor IgM cu alte proteine. Anticorpii produși de organism pot recunoaște „incorect” un antigen din alte microorganisme ca antigen Borrelia.
Cele mai frecvente „greșeli” apar la persoanele infectate cu treponema pallidum, herpesvirusuri și la persoanele cu lupus eritematos sistemic și alte boli reumatice.
Test ELISA - rezultate. Pot fi fals negative?
Rezultatele negative false pot apărea într-un stadiu incipient al infecției, apoi testul trebuie repetat după aproximativ 3-4 săptămâni. Aceasta se numește fereastra serologică, adică perioada inițială de infecție în care organismul nu a „reușit” încă să producă anticorpi specifici.
La fel, la persoanele cu imunodeficiență care nu produc suficienți anticorpi.
O mare problemă, mai ales în cazul infecțiilor foarte intense, este apariția așa-numitelor complexe imune care sunt compuse din antigeni Borrelia și anticorpi specifici pentru aceștia.
Ca rezultat, anticorpii devin „invizibili” pentru metodele utilizate în mod obișnuit, cum ar fi ELISA și, deși sunt prezenți în materialul testat, nu pot fi detectați.
În astfel de cazuri, laboratorul poate folosi descompunerea complexelor imune. Acest tratament este conceput pentru a elibera anticorpii. Cu toate acestea, această metodă nu este utilizată pe scară largă din cauza lipsei de standardizare în laboratoare.
Merită știutDe ce diagnosticul bolii Lyme nu este ușor?
Acest lucru se datorează complexității răspunsului imun împotriva lui Borrelia și limitărilor metodelor de laborator. Diversitatea soiurilor și apariția altora noi care provoacă infecții, în special pe continentul european, nu facilitează dezvoltarea unor metode de diagnostic eficiente.
Au apărut recent mai multe soiuri în Europa, cum ar fi Borrelia bissetii, Borrelia valaisiana și Borrelia spielmanii. În plus, în corp, spirochetele Borrelia se pot transforma în chisturi sau pot rămâne în locuri ale corpului inaccesibile celulelor sistemului imunitar.
Fiind astfel „invizibil” pentru sistemul imunitar. În plus, s-a demonstrat că țesuturile pot conține fragmente de bacterii care au proprietăți puternic pro-inflamatorii. Se crede că sunt responsabili pentru simptomele cronice ale bolii Lyme, în ciuda rezultatelor negative ale testelor de laborator.
Literatură
1. Witecka-Knysz E. și colab. Boala Lyme: de ce diagnosticul este atât de dificil? Diagnostician de laborator aprilie 2007.
2. Moore A. și colab.Liniile directoare actuale, capcanele clinice comune și direcțiile viitoare pentru diagnosticul de laborator al bolii Lyme, Statele Unite. Emerg Infect Dis. 2016 iulie; 22 (7).
3. Diagnosticul de laborator al bolilor transmise prin căpușe. Recomandări ale grupului de lucru: Camera Națională a Diagnosticilor de Laborator, Institutul Național de Sănătate Publică-Institutul Național de Igienă, Consultant național în domeniul bolilor infecțioase, Departamentul de Boli Infecțioase și Neuroinfecții, Universitatea Medicală din Białystok, Societatea Poloneză de Virologie, Varșovia 2014
4. Hosseini S. și colab.: Test imunosorbent legat de enzime (ELISA) De la A la Z. Springer 2017.
